ELISA背景深及全部呈有色原因是什么？

點擊次數(shù)：18920 發(fā)布時間：2016/5/17 8:21:45

　五月初，清華大學的楊老師在我司購買了3個elisa試劑盒，前段時間，楊老師反饋ELISA背景深，全部呈有色，問是什么原因？希望能得到技術老師的解答。我司陳技術有著6年的ELISA酶聯(lián)免疫法的操作經(jīng)驗，有著豐富的實驗經(jīng)歷，為楊老師解答了心中的疑問，深受楊老師的贊揚！就楊老師的問題，我司陳技術做了以下分析：

ELISA實驗中，背景深，全部呈有色（通常的Elisa背景值OD<0.2）

根據(jù)陳技術的分析，可能存在的原因有以下幾條：

1、ELISA實驗可能原因：實驗過程中洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標記物殘留；

解決辦法：洗液準確配制；充分洗滌，靜置15秒，徹底拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應棄去不用，不要反復使用，否則易造成污染。

2、ELISA實驗可能原因之二：底物污染，未避光保存，出現(xiàn)顏色；

解決辦法：棄去底物，重新配置

3、ELISA實驗可能原因之三：樣品稀釋液污染；

解決辦法：棄去稀釋液，重新配置

4、ELISA實驗可能原因之四：吸頭重復使用，未洗凈或消毒不徹底；

解決辦法：吸頭盡可能一次性使用

5、ELISA實驗可能原因之五：不正確的孵育時間，溫度（尤其是底物孵育的時間）；

解決辦法：*為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。完全按照說明書要求

6、ELISA實驗可能原因之六：偶聯(lián)抗體（streptavidin-HRP）濃度過高；

解決辦法：按照說明書調(diào)整到*佳的濃度

7、ELISA實驗可能原因之七：板子不正確的貯存；

解決辦法：酶標板貯存于2-8 ℃；使用結合力低點的Elisa板

8、ELISA實驗可能原因之八：沒有正確封閉；

解決辦法：在標準品稀釋液中加入動物蛋白或延長封閉時間

9、ELISA實驗可能原因之九：樣本溶血嚴重；

解決辦法：建議使用非溶血或輕微溶血樣本，嚴重溶血樣本會導致背景偏高。

一般上海情況下，ELISA實驗中，背景深，全部呈有色的原因都一一列出來了！陳技術的表現(xiàn)讓楊老師很滿意！這次試驗完成后，準備下次再訂購2盒。

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