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技術(shù)文章

ELISA實(shí)驗(yàn)樣本前期準(zhǔn)備

點(diǎn)擊次數(shù):17732   發(fā)布時(shí)間:2016/5/9 10:51:16

   大家都知道,實(shí)驗(yàn)前,我們在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃,首先必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。然后對收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測的樣本,及時(shí)儲存在4℃?zhèn)溆?/span>(注:對于隔天再檢測的樣本,及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆,有條件的,-70℃凍存?zhèn)溆谩?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融

  下面我們分別對不同的樣本的處理做一個(gè)簡單的說明:

一、關(guān)于液體類標(biāo)本:液體類標(biāo)本包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

1. 血清:

  室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

2. 血漿:

  應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

3. 尿液:

  用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:

  檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。

二、培養(yǎng)細(xì)胞

  檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

三、組織標(biāo)本

  切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

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